一步法RNA提取試劑 TRIZOL 

       簡介: TRIzol是一種新型總RNA抽提試劑，可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫*酸胍等物質，能迅速破碎細 胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。 

TRIzol在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性，因此對純化DNA及標準化RNA的生產十分有用。 

TRIzol的成分: TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質解聚得到釋放。苯酚雖 可有效地變性蛋白質，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基kuilin、異硫*酸胍、β-巰基乙醇等來抑制 內源和外源RNase（RNA酶）。

※0.1%的8－羥基kuilin可以抑制RNase，與氯仿聯合使用可增強抑制作用。

※異硫*酸胍屬于解偶劑，是一類強力的蛋白質變性劑，可溶解蛋白質并使蛋白質二級結構消失，導致細胞結構降解，核蛋 白迅速與核酸分離。 

※β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質中的二硫鍵。 TRIzol的使用方法: 用勻漿器將組織磨碎，加入TRIzol處理組 織。5分鐘后加入氯仿，以每分鐘12000轉離心5分鐘，樣品即分成水樣層、中間層和有機層。 

※RNA存在于水樣層中，收集水樣層后可以通過異丙醇沉淀RNA來還原。 

※在除去水樣層后，有機層中的DNA和蛋白質也能相繼以沉淀的方式還原：乙醇能使中間層的DNA沉淀析出，在有機層中 加入異丙醇能沉淀出蛋白質。 每100ml TRIzol可以抽提100個六孔板中的樣品或100個50-80mg的組織樣品。無論樣品是 人、動物、植物還是細菌組織，該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(約五百萬個)及大量的組織(≥1g)和細胞(超過一千萬 個)均有較好的分離效果。 每一百萬細胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA，每毫克組織用TRIzol抽提可得1-10微克RNA（產 量因細胞和組織不同而異）。 TRIzol操作上的簡便性允許其同時處理多個樣品，所有的操作可以在一小時內完成。 TRIzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白質的污染，故而能夠作RNA 印跡分析、斑點雜交、poly(A)+ 選擇、體外翻譯、 RNA酶保護分析和單分子克?。≒CR）。 

※如果是用于PCR，當兩條引物位于單一外顯子內時，建議用級聯擴大的DNase I(Cat. No. 18068)來處理抽提的總RNA。 

※TRIzol試劑能促進不同種屬、不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA經過瓊脂糖凝膠電泳并用 溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15kb之間的不連續的高分子量條帶（mRNA和hnRNA成分），兩條優勢核糖體RNA條帶 位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA, 5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時，其A260/A280 比值≥1.8。抽提小RNA時宜-70℃沉淀過夜。 TRIzol對人體有害，使用時應戴一次性手套，注意防止濺出。 

這種TRIZOL試劑的酚和異硫*酸胍 的均相溶液可直接用于從人類、動物、植物、細菌等的細胞或組織中提取總RNA、DNA或蛋白質。 TRIZOL試劑純化的RNA 可用于PCR、RNA印跡分析、poly(A)+篩選或斑點雜交。純化的DNA和蛋白質分別適用于DNA和蛋白質印跡分析。

◆ 獲得高純度RNA（A260/A280>1.9） 

◆ 在1小時內分離RNA；在3小時內分離DNA或蛋白質 

◆ 鮮明的紅色染料使去除含RNA的液相簡單便捷 

◆ 無論是小量的細胞（5×106）或組織（50-100mg）還是大量的細胞（107）或組織（>1g）都可得到出色的結果 

◆ 在4℃條件下可穩定保存兩年以上 

◆ 可使用TRIZOL用于組織或細胞； 使用TRIZOL LS用于血液或其他液體樣品 

品名: TRIzol Reagent Cat. No. 15596-026 TRIzol® Reagents are ready-to-use,monophasic solutions of phenol and guanidine isothiocyanate suitable for isolating total RNA, DNA, and proteins (1-6). Isolation procedures are based upon improvements to the single-step RNA isolation method General Specifications Brand TRIzol® Final Product Transcriptome RNA micro RNA Total RNA High Throughput Compatibility Manual Protocols Isolation Technology Organic Extraction Number of Reactions 100 Preps Product Size 100 ml Purification Time 1 hr Quantity 1 Sample Type (General) Viral Samples Plant Samples Tissue Blood Bacteria Yeast Cells Scale Scaleable Starting Material (Cell #) Up to 1g Tissue, Up to 1 x 10^7 cells System TRIzol Yield (up to) 8 mg Top Contents & Storage: TRIzol® and TRIzol® LS Reagents include the indicated amount of reagent. The TRIzol® Max™ Bacterial RNA Isolation Kit contains TRIzol® Reagent and Max Bacterial Enhancement Reagent. Store at 2°C to 8°C.