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心肌缺血腦缺血動物模型
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一、心肌缺血實驗模型:

        以手術方式短暫結扎冠脈的左前降支。其中結扎階段屬于缺血過程,而解除結扎后屬于再灌注過程。該模 型根據實驗需求可延長再灌注足夠長的時間。這一模型造成的是局灶性的心肌IRI,比較符合機體IRI的病 理過程,但是實驗結果受手術和機體內環境的影響較大。

實驗動物: C57BL/6J小鼠 ,雄性

體重:22g±2g

周齡:8周

動物等級:SPF級

手術方法: 

       動物深度麻醉,確認麻醉狀態后,備皮,安裝好心電監護儀,消毒局部皮膚,鋪洞巾后剪開肋間皮膚, 鈍性分離肌肉、打開心包膜,將心臟推出體外,暴露左冠狀動脈前降支,用6-0無菌絲線快速結扎,打活 結,看到心臟底部變白,用荷包縫法迅速關閉胸腔,擠壓防止氣胸,造成左室前壁心肌缺血。分別記錄術 前、缺血時心電圖變化。

到達缺血時間以后,打開胸腔,解開活結,再次關閉胸腔,縫合肌肉皮膚,進行心肺復蘇。分別記錄術 前、缺血時和再灌注后的心電圖變化。造模成功后進行藥物治療,術后觀察動物活動、采食情況。處死前 對實驗動物采血。術后進行心肌組織取樣、TTC-Evans blue染色,進行心梗面積計算。


手術后護理及觀察:

1、術后護理:術后單籠飼養,常規飼料及飲水。

2、觀察:每天觀察動物死亡或瀕死情況、精神狀態、行為活動、進食等。 

3、傷口局部觀察:術后每天1次,觀察傷口有無紅腫發炎等。 

4、體重稱量記錄:術后體重稱量記錄:術后2次/周,稱重并記錄體重變化情況。 

二、腦缺血動物模型 腦缺血在臨床上具有較高的發病率和死亡率,嚴重危害中老年患者健康,尋找有明確療效且作用機制清晰 的預防和治療腦梗死的藥物是當前研究的前沿課題和熱點領域。因此,腦缺血動物模型的制備在科學研究 中具有重要意義。 

剪開頸部皮膚,鈍性分離頸部肌肉,暴露并游離單側頸動脈,穿線備用。 

動脈夾暫時夾閉主動脈,并結扎頸外動脈。主動脈用注射器針頭挑開小口,插入自制線栓到頸內動 脈,大約 2.5-3cm。結扎頸內動脈,結扎主動脈近心端,松開動脈夾。 

逐層縫合,根據實驗的需要的缺血時間進行拔栓手術(再灌注),拔栓時動物要完全麻醉,把出線栓 的長度約為 0.5cm。 模型成功的評判方法 神經功能缺損(NDS)評分 0 分:活動基本正常,無明顯神經病學癥狀; 

1 分:左側前爪無法完全伸展; 

2 分:爬行時向左側轉圈; 

3 分:行走時向偏癱側傾倒; 

4 分:不能自動行走,有意識障礙 

5 分:死亡 

水迷宮實驗 Morris 水迷宮(Morris water maze, MWM)實驗是一種強迫實驗動物(大鼠、小鼠)游泳,學習尋找 隱藏在水中平臺的一種實驗,主要用于測試實驗動物對空間位置感和方向感(空間定位)的學習記憶能力。 

TTC 染色 TTC 染色是常用來評價腦缺血損傷的指標,缺血區域會呈白色。

HE 染色 一般發生缺血損傷的腦組織的神經元細胞會受到明顯損傷(上側正常,下側損傷) 

TUNEL 染色 發生損傷的腦組織,TUNEL 染色的細胞會明顯增多。 


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